一、原种料袋(瓶)灭菌方法
制作原种时,必须当天拌料,当天装瓶(袋)和灭菌(如条件允许,也可在5℃~10℃短时间保存)。以免因温度高、时间长使培养料酸败变质造成不必要的经济损失。1.高压蒸汽灭菌法:料瓶灭菌 首先打开高压蒸汽灭菌锅的进水阀或锅盖,往高压锅内加水至规定的水位。之后把进水阀关闭好,把料瓶竖立摆放装满蒸锅后,封闭好锅盖,对角拧紧螺丝,开始大火加热,当高压蒸汽灭菌锅压力表指针升至0.05兆帕时,应旋开放气阀,使高压蒸汽灭菌锅内的冷空气慢慢排尽。待冷空气全部排尽后,压力表指针将至0位时,继续急火加热,使放气阀往外排直气时,关闭放气阀。当压力表指针再升至0.15兆帕时,保持压力不再升高和下降,开始计算灭菌时间,继续灭菌2小时候,停止加热!
之后,旋开放气阀,慢慢排尽锅内的热空气。利用锅内余热烘干潮湿的棉塞或无棉盖体后即可出锅。料袋灭菌 按上述高压蒸汽灭菌锅灭菌方法进行。需要说明的是:采用高压蒸汽灭菌锅灭菌时,不论前期排放冷空气或灭菌完毕后排放蒸汽过程,都必须慢慢排放,如排气过急、过快易造成料袋膨胀或破损及棉塞脱落。2.常压蒸汽灭菌法:首先把常压锅内加足水,之后,把料瓶(袋)全部装入常压锅后,点燃火,配用300瓦鼓风机大火加热,一般从点火至常压锅上大气,最好在2-3小时内达到。如长时间达不到100℃,很容易使料袋或料瓶内的培养基酸败,造成损失。蒸锅灭菌时间后,停止加温,此时停用鼓风机,再继续焖6小时后即可打开常压锅门,此时已达到灭菌目的!
二、料袋(瓶)接种与菌丝培养
1.接种方式:(1)电热杯开放式接种方法 具体操作过程:首先,把已灭好菌的料瓶和所需的菌种、接种工具及2-3热水瓶开水等全部放入接种室内。待廖萍温度降至20℃以下时开始接种。然后把电热杯加足开水插好电源。待杯中水开后接种。母种固定在接种架上,使试管口蒸汽上方5~6厘米处,然后拔掉试管棉塞,拿出杯中的接种钩稍凉后,深入试管内部把母种培养基前段2厘米切割钩出后,再使培养基横切分成8块,然后钩出一块菌种,料瓶口对准试管口,直接把菌块接入瓶内,迅速在蒸汽上方塞好棉塞。注意事项:电热杯接种方法只适宜瓶装原种或栽培种接种;禁止用于袋装接种,否则料袋易污染大量杂菌!
(2)电子臭氧接种器接种方法 具体操作过程:首先,把接种室内的杂物等全部清理干净,已灭好菌的料袋(瓶)和所需的接种工具及菌种一起放入接种室内;工作台上放好臭氧接种器,接种器上方安装1个270瓦的红外线灯之后,打开接种室紫外线灯和接种器的双开关,同时每立方米空间用5克菇保王或克霉灵烟雾熏蒸消毒灭菌;紫外线灯应预照20分钟,待紫外线光波稳定后,继续消毒灭菌30分钟后关闭,烟雾熏蒸达2-3小时后,待料袋(瓶)温降至20℃以下时开始接种。打开红外线灯预热3分钟,在接种器前10厘米处,把试管(母种)固定在接种架上,拔掉试管棉塞,接种钩应严格通过酒精灯火焰烧红灭菌,待接种钩烧红后,放入究竟内快速冷却,之后拿出接种钩并点燃蘸在接种钩上面的酒精,待自然燃烧后,伸入试管内部把母种培养基前段2厘米切割钩出后,再把母种培养基横切5-8块,然后钩出一块菌种,料袋或料瓶口对准试管口,把菌块接入袋内或瓶内,在无菌区内迅速塞好棉塞或盖上无棉盖体!
注意事项:接种时的试管口,料瓶、料袋口及拔棉塞和塞棉塞时都必须在无菌区进行,否则易污染杂菌。3.原种菌丝培养:接种后的料袋(瓶)迅速移入培养室内的多层发菌架上火直接吊袋发菌。发菌期间,保持培养室越干燥越好,地面撒一层生石灰粉防潮、防杂菌。接种前10天内,室内温度以不超过28℃为宜。之后,当菌种块萌发并菌丝封满料面时,室内温度也逐渐增高,这时应把室内温度降至25℃~26℃,待料袋(瓶)菌丝长至2/3时,室内温度应继续下降至20℃~22℃,知道菌丝长满全袋(瓶)为止。发菌期间应经常通风换气,保持室内环境清洁卫生!
玉米大碴子、整玉米粒培养基,发菌10天后,当料面菌丝达到直径4~5厘米圆球状时,开始用手晃动料瓶,使料瓶里的菌种球和培养基混合均匀(注意:在晃动料瓶时禁止使菌种和培养料接触到瓶内上方的棉塞,否则易污染杂菌)。每天检查1次有无杂菌,如发现料瓶或料袋内培养料上出现红、黑、黄等异常颜色即使杂菌,应立即拿出隔离培养室。经过晃匀的玉米大碴子、整玉米粒菌种,在适温条件下,一般5~7天内菌丝全部愈合好,再继续培养5天左右,使菌丝充分吃透培养料内部,表面形成富有弹性的洁白菌丝后即可使用。这样的菌种生命力强,接种后菌种萌发快、长势旺、抗杂菌能力强、菌种成品率高。树叶粉、棉籽壳、枝丫末、玉米芯培养料不用晃瓶,待菌丝全部长满袋(瓶)后,室温降至18℃以下继续培养6~10天后使用!
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